大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1（ MCP-1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使
用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96T
20ng/L-600ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本單核細(xì)
胞趨化蛋白-1（ MCP-1）含量。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠胃動素（MTL）
水平。用純化的大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1（ MCP-1）抗體包
被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加大
鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1（ MCP-1），再與HRP標(biāo)記的單核細(xì)
胞趨化蛋白-1（ MCP-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗
體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶
的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色
。顏色的深淺和樣品中的單核細(xì)胞趨化蛋白-1（ MCP-1）呈
正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通
過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1（ MCP-1）
濃度。
試劑盒組成:
1、30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2、酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（1200ng/L）0.5ml×1瓶
3、酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提
取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放
于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶
的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一
支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
600ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
75ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
37.5ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及
酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。
在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先
加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終
稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸
及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋
后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，
每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干
。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外
。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯
色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色
立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔
的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行
。
操作程序總結(jié)：
1.準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應(yīng)10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內(nèi)度OD值
7.計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方
可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋
中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫
助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以
避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)
本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)
本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的
OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，
計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶
標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期：
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月
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